Полимеразная цепная реакция (далее ПЦР) — это высокоточный метод молекулярно-генетического исследования материла, который позволяет выявить у человека различные инфекционные заболевания и установить генотип возбудителя.
ПЦР для выявления различных заболеваний стала применяться в самом конце прошлого века. Первооткрывателем этого метода исследования является американский биохимик Кэри Муллис. Свое открытие он сделал в 1983 году. Но еще несколько лет понадобилось, чтобы доработать метод.
Суть метода
С помощью ПЦР-диагностики можно обнаружить фрагменты чужеродного ДНК в любой жидкой среде организма. На анализ могут быть взяты такие жидкости:
- Кровь.
- Слюна.
- Мокрота.
- Выделения из половых органов.
- Смывная жидкость бронхов.
- Желудочный сок.
Лечащий врач сам определяет, какую биологическую жидкость лучше взять на анализ при конкретном заболевании.
ПЦР-диагностика позволяет не только обнаружить микрофрагменты чужеродной ДНК, но и определить к какому конкретному виду она относится. То есть с помощью ПЦР можно не только точно установить возбудителя заболевания, но и выяснить к какому виду он принадлежит.
Процесс анализа ПЦР — очень сложный. Он состоит из нескольких этапов:
- Сначала нужно обнаружить фрагменты вредоносной ДНК в предоставленном образце.
- Копирование фрагмента ДНК. Маленького участка ДНК для анализа недостаточно, поэтому его копируют. Нуклеиновая кислота может копироваться в пробирке с помощью фермента полимеразы (вне живого организма). В пробирке образуется множество клонов, то есть происходит цепная реакция. Весь процесс происходит в три этапа под воздействием различных температур.
- Когда генетического материала становится достаточно для исследования, тогда возбудитель определяется обычными методами.
Метод ПЦР очень точен и может выявить наличие любого возбудителя по небольшому фрагменту ДНК или РНК.
ПЦР-исследование туберкулеза
ПЦР-анализ на туберкулез является самым информативным методом диагностирования этого заболевания. Относительно туберкулеза этот метод позволяет не только установить наличие микобактерий в организме, но и определить к какому виду они принадлежат.
Результат ПЦР диагностики может быть простой и расширенный. В простом результате указывается только наличие/отсутствие микобактерии. Расширенный результат дает представление о дополнительных параметрах протекания заболевания. Правильно понять, что написано в результате анализа ПЦР может только фтизиатр.
ПЦР-диагностика туберкулеза не проводится всем без исключения. Это объясняется дороговизной реактивов и недоступностью проведения исследования в некоторых отдалённых районах (в таких местах пользуются другими методами диагностики).
Показаниями для проведения ПЦР-исследования являются:
- Длительный контакт с больным туберкулезом.
- Беременность. ПЦР крови на туберкулез является самым быстрым и безопасным методом для беременной женщины.
- Экстренная ситуация. Например, необходимость срочного оперативного вмешательства, при котором нужно точно установить наличие/отсутствие туберкулеза в организме.
- Аллергическая реакция на туберкулиновые пробы.
- ВИЧ-инфекция.
- Невозможность диагностирования заболевания другими способами, при наличии явных признаков туберкулеза.
- Неоднозначные симптомы, которые не позволяют создать четкую клиническую картину заболевания (болезни верхних дыхательных путей, сопровождающиеся большим количеством мокроты, кровохарканьем и пр.).
Метод ПЦР, при всей своей сложности и дороговизне, проводится и расшифровывается в течение нескольких часов. Что делает этот метод золотым стандартом при диагностике туберкулезной инфекции.
Забор материала — это первый этап при выполнении ПЦР-исследования. Для того, чтобы выполнить качественный анализ, нужно соблюдать определенные правила по сбору материла:
- Для ПЦР мокроты на туберкулез нужно тщательно провести туалет полости рта. Делать это нужно вечером и утром перед анализом. Все это время не есть. Вечером выпить муколитическое средство для лучшего отхождения мокроты.
- Перед сдачей крови на ПЦР нужно не употреблять пищу в течение 8 часов. Лучше всего производить забор крови утором натощак. Курить перед забором крови также нельзя. Кровь берется из вены на локтевом сгибе руки в стерильную пробирку. В эту же емкость добавляется антикоагулянт, чтобы кровь оставалась жидкой. Смешивать антикоагулянт с кровью нужно очень аккуратно, не делая резких движений. Если кровь была взята не в лабораторных условиях, то она должна быть предоставлена лаборанту до истечения пятичасового срока. Иначе результат может быть не точным.
- Моча собирается в стерильную емкость утром, до приема пищи. Перед сбором мочи необходим тщательный туалет промежности.
- Остальные виды жидкостей (смывы с бронхов, спинномозговая жидкость) может собрать только специалист в условиях стационара.
- Перед забором жидкостей на ПЦР-исследование запрещено принимать некоторые препараты (например, прием некоторых антибиотиков нужно прекратить за две недели до забора материала).
- Требования к лаборатории, в которой проводится забор анализов на ПЦР очень строгие. Лаборатория должна быть стерильна, чтобы не произошло перекрестное загрязнение материала. В этом случае результаты могут быть ложноположительными.
ПЦР-тест на туберкулез — высокоточный информативный анализ. И требования к его проведению крайне строгие. Чтобы анализ получился, нужно соблюдать регламент.
Для работы в ПЦР-лаборатории приглашаются специально обученные врачи: бактериологи, вирусологи, микробиологи. Все они прошли дополнительное обучение для работы на сложном оборудовании.
Лаборатория должна иметь лицензию на выполнение работ связанных с бактериологически-опасными вирусами и бактериями.
В самой лаборатории должны быть выделены такие рабочие зоны:
- Зона приемки и сортировки проб.
- Зона подготовки проб. В этом помещении выделяются нуклеиновые кислоты из образцов материала.
- Зона проведения реакционных проб.
- Зона для учета результатов и расшифровки анализов.
Все помещения располагают последовательно. Допуск в эти зоны разрешен только работающим там сотрудникам, которые при входе соблюдают правила личной защиты от бактерий и вирусов.
Лучше, если есть возможность расположить лабораторию в отдельно стоящем здании с собственной системой вентиляции.
В лаборатории соблюдаются стерильные условия работы, чтобы избежать перекрестного загрязнения проб. Даже если один фрагмент чужеродной ДНК попадет в исследуемый материал, ПЦР его размножит, и анализ получится ложноположительным.
В каждой зоне лаборатории имеется свой набор оборудования и посуды для проведения исследований. Также имеются свои холодильники, которые не могут быть использованы в других целях, кроме хранения материала конкретной зоны исследований.
Использованные расходные материалы и остатки биологического материала уничтожаются специальными способами, в соответствии с инструкциями.
Плюсы ПЦР-диагностики
ПЦР-тест на туберкулез имеет множество плюсов, которые делают этот метод диагностики все более востребованным:
- Срок проведения. Несмотря на сложность проведения анализа, он готовится намного быстрее других лабораторных методов диагностики туберкулеза (около пяти часов). Это свойство анализа ПЦР становится особенно важным, когда анализ необходимо провести экстренно.
- Анализ ПЦР абсолютно безопасен и может проводиться беременным женщинам и детям.
- ПЦР-исследование можно сделать, когда по каким-то причинам нельзя выполнить другие методы диагностики.
- С помощью ПЦР-диагностики можно провести исследование любой биологической жидкости на выбор. В некоторых случаях это имеет большое значение.
- Позволяет обнаружить возбудителя на любой фазе заболевания. Даже после проведенного лечения, сохранившиеся остатки ДНК мертвых микобактерий будут обнаружены.
- Высочайшая чувствительность этого метода позволяет обнаруживать в биологическом материале даже единичные фрагменты ДНК микроорганизмов.
- Метод ПЦР позволяет не только обнаружить присутствие заболевания, но и может определить генотип возбудителя, отличив его от похожих микроорганизмов.
- ПЦР-исследование очень эффективно при рецидивирующем течении заболевания.
- Благодаря высочайшей чувствительности, анализ ПЦР может распознать микобактерии в организме человека, когда он только недавно инфицировался туберкулезом, задолго до появления клинических симптомов.
Казалось бы, метод ПЦР-диагностики содержит в себе только плюсы, но это не так.
Минусы ПЦР-диагностики
Минусы этого метода исследования тоже существенны. При выборе метода исследования туберкулеза это также стоит учитывать:
- Это дорогостоящий метод исследования. Для проведения ПЦР-диагностики нужна специально-оборудованная лаборатория. Оборудование для таких исследований стоит очень дорого, и не во всякой лаборатории оно имеется. В крайнем случае, можно обратиться в платную лабораторию.
- Сразу же после проведенного лечения метод ПЦР применять не рекомендуется. В крови пациента некоторое время сохраняется небольшое количество живых и мертвых микобактерий. Если провести анализ в этот период, он покажет ложноположительный результат.
- При мутациях микобактерий, анализ будет недостоверным, так как нормальная ДНК не сможет синтезироваться.
- Для ПЦР-исследования имеет значение правильный выбор биологической жидкости на анализ.
- Сверхчувствительность. Это тот случай, когда достоинство метода становится его недостатком. Если при проведении анализа в биологический материал каким-то образом попадет даже единичный фрагмент чужеродного ДНК, то ПЦР его размножит, и будет получен ложный результат.
Где пройти ПЦР-исследование на туберкулез
ПЦР-лаборатория имеется только в крупных противотуберкулезных диспансерах и диагностических центрах.
Объясняется это высокой стоимостью оборудования и высокими требованиями к содержанию лаборатории (реактивы, обработка).
Медицинские чиновники не сильно переживают из-за отсутствия ПЦР-лаборатории в каком-то конкретном населенном пункте, поскольку анализы на туберкулёз можно провести другими методами (культивирование микобактерий, микроскопическое исследование).
Если в населённом пункте нет бесплатной ПЦР-лаборатории, пациент по желанию может обратиться в платное учреждение.
В последнее время ПЦР-диагностика занимает все более прочные позиции в диагностике туберкулеза и других заболеваний, отодвигая на задний план другие методы диагностики.
Выявление возбудителя туберкулеза (Mycobacterium tuberculosis), с помощью метода полимеразной цепной реакции (ПЦР) определяется генетический материал (ДНК) микобактерии в образце биоматериала.
Туберкулез — широко распространенная инфекция. Возбудитель туберкулеза — Mycobacterium tuberculosis — передается воздушно-капельным путем от больных туберкулезом в активной форме. У 90 % людей после первичного инфицирования микобактерии оседают в нижних отделах легких и не приводят к развитию заболевания, так как вырабатывается иммунный ответ, не допускающий увеличения количества бактерий. Однако в случае сильного ослабления иммунной системы туберкулезные палочки начинают активно размножаться и туберкулез переходит из латентной формы в активную. Возможно поражение легких, костей, суставов, мочеполовых органов, лимфатической системы, кожи, глаз и нервной системы.
Основным методом диагностики является бактериологическое исследование (чувствительность 80-85% при активных легочных формах и 7-10% — при туберкулезе почек). Однако микобактерии очень медленно растут на питальных средах, и для получения даже предварительного ответа при бактериологическом исследовании требутся 3 недели. Бактериологический метод выделения микобактерий туберкулеза весьма эффективен в основном при легочных формах туберкулеза, а в отношении других форм проявляет низкую чувствительность (выявление положительных проб не превышает 50%). Поэтому в таких случаях до получения результатов бактериологического исследования используют метод ПЦР.
Bысокая чувствительность ПЦР позволяет обнаружить в исследуемом материале единичные клетки и даже их фрагменты ДНК. Метод исключает перекрёстные реакции. ПЦР позволяет дифференцировать ограниченные и диссеминированные формы туберкулёза, особенно у детей даже при отрицательных результатах микробиологических исследований.
Mycobacterium tuberculosis в исследуемом биоматериале в норме отсутствуют. Их выявление в исследуемом материале с высокой вероятностью указывает на этиологическую роль микобактерий в развитии заболевания. Вместе с тем следует отметить, что применение ПЦР для диагностики туберкулеза не заменяет бактериологический метод.
| Стоимость услуги: | 400 руб.* Заказать |
Бронхоальвеолярный лаваж. Условия подготовки определяются лечащим врачом.
Мокрота. После предварительного полоскания полости рта водой.
Плевральная жидкость. Условия подготовки определяются лечащим врачом.
Синовиальная жидкость. Условия подготовки определяются лечащим врачом.
Спинномозговая жидкость. Условия подготовки определяются лечащим врачом.
Туберкулез – широко распространенное в мире хроническое инфекционное заболевание, вызываемое различными видами микобактерий из группы Mycobacterium tuberculosis complex. При туберкулезе чаще поражаются органы дыхания, но могут быть вовлечены в процесс и другие органы и системы организма — суставы, кости, мочеполовая система, кожа и т.д. В группу Mycobacterium tuberculosis complex, вызывающую инфекционное заболевание у человека, объединены: M.tuberculosis, M.bovis, M.africanum, M.microti, M.canettii, M.caprae, M.pinnipedii, M.mungi. Источником инфекции является больной человек, основной путь заражения – воздушно-капельный. В развитии инфекционного процесса большую роль играют неблагоприятные условия жизни, труда, а также факторы, влияющие на снижение иммунитета. При попадании микобактерий в организм, происходит их транспорт в региональные лимфатические узлы и формирование первичных туберкулезных комплексов с развитием гранулем, наиболее часто в легочной ткани. В ряде случаев возможно формирование очагов в почках, половых органах, костях. Клинически реактивный туберкулез характеризуется кашлем, часто с кровохарканием, субфебрильной температурой, снижением массы тела, слабостью.
Анализ на микобактерии туберкулеза методом ПЦР включает определение ДНК Mycobacterium tuberculosis complex (M.tuberculosis, M.bovis, M.africanum, M.microti).
Цель исследования. Обследование лиц с подозрением на туберкулез.
Референсные значения: не обнаружено
Интерпретация: выявление ДНК Mycobacterium tuberculosis complex свидетельствует о наличии инфекционного процесса.
» [«serv_cost»]=> string(3) «400» [«cito_price»]=> NULL [«parent»]=> string(2) «25» [10]=> string(1) «1» [«limit»]=> NULL [«bmats»]=> array(5) < [0]=>array(3) < ["cito"]=>string(1) «N» [«own_bmat»]=> string(2) «12» [«name»]=> string(45) «Спинномозговая жидкость» > [1]=> array(3) < ["cito"]=>string(1) «N» [«own_bmat»]=> string(2) «12» [«name»]=> string(39) «Плевральная жидкость» > [2]=> array(3) < ["cito"]=>string(1) «N» [«own_bmat»]=> string(2) «12» [«name»]=> string(14) «Мокрота» > [3]=> array(3) < ["cito"]=>string(1) «N» [«own_bmat»]=> string(2) «12» [«name»]=> string(41) «Синовиальная жидкость» > [4]=> array(3) < ["cito"]=>string(1) «N» [«own_bmat»]=> string(2) «12» [«name»]=> string(47) «Бронхоальвеолярный лаваж» > > >
| Тип | В офисе |
|---|---|
| Спинномозговая жидкость | |
| Плевральная жидкость | |
| Мокрота | |
| Синовиальная жидкость | |
| Бронхоальвеолярный лаваж |
Бронхоальвеолярный лаваж. Условия подготовки определяются лечащим врачом.
Мокрота. После предварительного полоскания полости рта водой.
Плевральная жидкость. Условия подготовки определяются лечащим врачом.
Синовиальная жидкость. Условия подготовки определяются лечащим врачом.
Спинномозговая жидкость. Условия подготовки определяются лечащим врачом.
Туберкулез – широко распространенное в мире хроническое инфекционное заболевание, вызываемое различными видами микобактерий из группы Mycobacterium tuberculosis complex. При туберкулезе чаще поражаются органы дыхания, но могут быть вовлечены в процесс и другие органы и системы организма — суставы, кости, мочеполовая система, кожа и т.д. В группу Mycobacterium tuberculosis complex, вызывающую инфекционное заболевание у человека, объединены: M.tuberculosis, M.bovis, M.africanum, M.microti, M.canettii, M.caprae, M.pinnipedii, M.mungi. Источником инфекции является больной человек, основной путь заражения – воздушно-капельный. В развитии инфекционного процесса большую роль играют неблагоприятные условия жизни, труда, а также факторы, влияющие на снижение иммунитета. При попадании микобактерий в организм, происходит их транспорт в региональные лимфатические узлы и формирование первичных туберкулезных комплексов с развитием гранулем, наиболее часто в легочной ткани. В ряде случаев возможно формирование очагов в почках, половых органах, костях. Клинически реактивный туберкулез характеризуется кашлем, часто с кровохарканием, субфебрильной температурой, снижением массы тела, слабостью.
Анализ на микобактерии туберкулеза методом ПЦР включает определение ДНК Mycobacterium tuberculosis complex (M.tuberculosis, M.bovis, M.africanum, M.microti).
Цель исследования. Обследование лиц с подозрением на туберкулез.
Референсные значения: не обнаружено
Интерпретация: выявление ДНК Mycobacterium tuberculosis complex свидетельствует о наличии инфекционного процесса.
Продолжая использовать наш сайт, вы даете согласие на обработку файлов cookie, пользовательских данных (сведения о местоположении; тип и версия ОС; тип и версия Браузера; тип устройства и разрешение его экрана; источник откуда пришел на сайт пользователь; с какого сайта или по какой рекламе; язык ОС и Браузера; какие страницы открывает и на какие кнопки нажимает пользователь; ip-адрес) в целях функционирования сайта, проведения ретаргетинга и проведения статистических исследований и обзоров. Если вы не хотите, чтобы ваши данные обрабатывались, покиньте сайт.
Copyright ФБУН Центральный НИИ Эпидемиологии Роспотребнадзора, 1998 — 2020
! Продолжая использовать наш сайт, вы даете согласие на обработку файлов cookie, пользовательских данных (сведения о местоположении; тип и версия ОС; тип и версия Браузера; тип устройства и разрешение его экрана; источник откуда пришел на сайт пользователь; с какого сайта или по какой рекламе; язык ОС и Браузера; какие страницы открывает и на какие кнопки нажимает пользователь; ip-адрес) в целях функционирования сайта, проведения ретаргетинга и проведения статистических исследований и обзоров. Если вы не хотите, чтобы ваши данные обрабатывались, покиньте сайт.
detector