Пцр на микобактерии туберкулеза

Исследование для выявления возбудителя туберкулеза (Mycobacterium tuberculosis), в ходе которого с помощью метода полимеразной цепной реакции в реальном времени (РТ-ПЦР) определяется генетический материал (ДНК) микобактерии в образце биоматериала.

Туберкулез, микобактерии туберкулеза, палочка Коха.

Tuberculosis, Tubercle bacillus, Koch’s bacillus.

Полимеразная цепная реакция в режиме реального времени.

Какой биоматериал можно использовать для исследования?

Биоптат, венозную кровь, ликвор, мокроту, плевральную жидкость, первую порцию утренней мочи, эякулят.

Общая информация об исследовании

Туберкулез (от лат. tuberculum – «бугорок») – инфекционное заболевание человека и животных, передающееся преимущественно воздушно-капельным путем. Риск заразиться повышает подавление иммунитета, вызванное ВИЧ/СПИДом, диабетом, заболеванием почек, трансплантацией органов и применением иммуносупрессоров, беременностью, старением. Кроме того, наиболее подвержены ему те, кто контактирует с больными туберкулезом, а также дети до 5 лет после виража туберкулиновой пробы. К наиболее уязвимым группам населения относят бездомных, заключенных, мигрантов из стран с высокой заболеваемостью туберкулезом, наркопотребителей, а также пожилых людей.

Для данного исследования используется тест-система, основанная на выявлении геномной ДНК возбудителя туберкулеза с помощью полимеразной цепной реакции (ПЦР) в режиме реального времени (реал-тайм ПЦР). В современной диагностике это один из самых быстрых, универсальных и высокочувствительных методов.

Стандартные способы обнаружения микобактерий туберкулеза базируются на выращивании патогенных микроорганизмов в питательной среде. Сложности связаны с низкой скоростью роста колоний Mycobacterium tuberculosis – необходимо ожидать до 1,5 месяцев после взятия материала.

Высокой чувствительностью и специфичностью обладают молекулярно-биологические методы, основанные на детекции генетического материала микобактерий туберкулеза. Их важнейшим преимуществом является высокая скорость получения результата. Использование ПЦР реал-тайм позволяет выявить возбудитель туберкулеза уже в день получения клинического образца.

Бактериемия (попадание в кровь пациента микобактерий) может возникать на ранних стадиях туберкулезной инфекции, а также при развитии генерализованного или внелегочного туберкулеза. Она опасна тем, что иммунный ответ на бактерии вызовет сепсис и септический шок, чреватый смертью. Риск развития генерализованного туберкулеза наиболее высок у пациентов с ВИЧ на поздних стадиях, у тех, кто прервал противотуберкулезную терапию, а также у не обратившихся вовремя за медицинской помощью при появлении симптомов туберкулеза.

Диагностика туберкулеза у ВИЧ-инфицированных затруднена из-за иммуносупрессированного состояния организма, что зачастую проявляется в ложноотрицательных результатах туберкулиновых реакций и микробиологических тестов. В связи с этим тестирование на Mycobacterium tuberculosis методом ПЦР реал-тайм имеет большое значение.

Для чего используется исследование?

• Для диагностики туберкулеза легких (в частности, его генерализованных и внелегочных, связанных с бактериемией, форм), и контроля за его лечением.

Когда назначается исследование?

• При подозрении на внелегочный туберкулез.
• При симптомах бактериемии на фоне туберкулезной инфекции: повышенной температуре тела, потливости и пр. (при небольшом количестве бактерий в крови бактериемия может протекать бессимптомно).
• Если у пациента был длительный контакт с больным туберкулезом.
• При ненормальной реакции на туберкулиновую пробу у детей.
• Когда у пациента ВИЧ-инфекция.

Что означают результаты?

Референсные значения: отрицательно.

• Наличие возбудителя в исследуемом биоматериале. Это обычно встречается при активной форме туберкулеза, требующей лечения. Выявление большого количества микобактерий чаще всего указывает на внелегочную форму туберкулеза либо генерализацию инфекции.

• Возбудителя туберкулеза не выявлено. Бактериемия отсутствует.

Что может влиять на результат?

Эффективная противотуберкулезная терапия со временем приводит к исчезновению микобактерий в клиническом материале.

• Для назначения корректной схемы лечения при выявлении у пациента туберкулеза необходимо провести тест на чувствительность микобактерий к противотуберкулезным препаратам.

Кто назначает исследование?

Врач общей практики, терапевт, фтизиатр, уролог, гинеколог, инфекционист.

Где проводится: Тонус

Срок выполнения: 2 рабочих дня

+ Забор материала 200 руб.

+ Забор анализа на дому у взрослого (только Нижний Новгород) 200 руб.

Туберкулез – это распространенное социально значимое заболевание, характеризующееся поражением лёгких (чаще) и других органов. Возбудителями туберкулеза являются кислотоустойчивые бактерии рода Mycobacterium: Mycobacterium tuberculosis (занимает первое место по частоте заболеваний), Mycobacterium bovis (второе место), реже другие представители: M. bovis, M. bovis BCG, M. microti, M. africanum. Основной путь заражения туберкулезом – воздушно-капельный. Риск заразиться зависит от состояния иммунитета, частоты контакта с больным, бытовых и социальных условий.

Туберкулез в течение длительного времени может протекать скрыто, без каких – либо симптомов, его обнаружение в этом случае является случайной находкой при проведении флюорографии или рентгенографии грудной клетки. При развитии симптоматики больного беспокоит слабость, субфебрильная температура, потливость (особенно в ночное время), далее – постоянный кашель с отхождением мокроты или кровохарканьем, насморк, затруднение дыхания.

Диагностика туберкулеза складывается из обследования лёгких (рентгенография, флюорграфия, если речь идет о легочной форме заболевания) и лабораторных методов (анализ на микобактерию туберкулеза). Лабораторная диагностика туберкулеза включает в себя несколько методов: микроскопия мазка (чаще всего исследуют мокроту), классический культуральный метод, ИФА, ПЦР исследование. Специфичность ПЦР анализа на микобактерии туберкулеза составляет 100%.

Чтобы сдать анализ на микобактерии туберкулеза, от пациента не требуется специальной подготовки.

Сдать анализ на микобактерии туберкулеза необходимо в следующих случаях:

• Лихорадка, характеризующаяся ежедневным двойным повышением и понижением температуры тела. На фоне туберкулиновой гиперчувствительности или туберкулиновой анергии.
• Острые воспалительные заболевания верхних и нижних дыхательных путей с длительным контактом с туберкулёзным больным в анамнезе.
• Ненормальная реакция на туберкулиновую пробу (гиперчувствительность или анергия) на фоне обострения какого-либо системного заболевания.
• Подозрение на системную волчанку.

На данный момент существует достаточное количество лабораторных способов определения бактерий Коха. У каждого имеются определенные преимущества и недочеты, например, требуется наличие определенной концентрации клеток в пробе или достаточное время для культивирования.

На данный момент более приемлемым анализом считается ПЦР на туберкулез, который характеризуется высокой результативностью (100%) даже при наличии небольшого количества фрагментов генетического аппарата микобактерий Mycobacterium tuberculosis. Полимеразная цепная реакция дает возможность выявлять ограниченные и диссеминированные формы патогенеза, что важно при обследовании детей, когда микробиологическая диагностика не дала результата.

Что важно знать

Туберкулез – инфекционное заболевание, вызываемое микобактерией – палочка Коха. Чаще поражаются легкие, но очаги могут быть и в других тканях. Передается респираторно, а также со слюной, кровью, при совместном использовании бытовых приборов и тесном контакте в быту.

Заболевание протекает в двух формах:

1. Закрытая стадия. Больной при контакте не опасен для окружающих. В мокроте анализы не выявляются признаки возбудителей, ложной будет и ПЦР диагностика на туберкулез. При отсутствии лечения патогенез усугубляется.
2. Открытая стадия. Палочка Коха присутствует в биологических жидкостях человека, легко диагностируется лабораторными методиками. В таком состоянии человек является опасным для окружающих.

Обратите внимание. Поскольку начало туберкулеза легких протекает латентно, то проводится скрининг. Взрослые люди должны раз в год или два (зависит от региона проживания) проходить флюорографию, которая показывает наличие инфильтрата в тканях. Это дешёвый и быстрый способ диагностики.

На данный момент для выявления опасных микобактерий проводят ряд анализов:

• методы рентгенографии;
• КТ или МРТ;
• туберкулиновые пробы (реакция Манту).

Однако именно анализ крови на ПЦР на туберкулез дает наиболее достоверный результат, причем определяет наличие инфекции вне зависимости от локации очага.

Показания к проведению

Врач фтизиатр, пульмонолог или терапевт может направить больного на прохождение диагностики при наличии подозрений.

Кроме этого, тест ПЦР на туберкулез требуется, если:

• возможны внелегочные очаги;
• наличие признаков бактериемии на фоне туберкулезной инфекции (субфебрилитет, потливость и прочие);
• при регулярном контакте с инфицированным человеком;
• при ВИЧ-инфекции;
• ПЦР диагностика туберкулеза у детей показана при ненормальной реакции на пробу Манту;
• сильные увеличения лимфоузлов при заболевании нижних дыхательных путей (прикорневые воспаления легких, бронхиты);
• кровохарканье при этом человек слаб и быстро утомляется;
• длительный кашель после острых бронхитов и пневмоний.

Что представляет из себя ПЦР

Полимеразная цепная реакция основана на узнавании целых цепочек бактериальной ДНК и РНК или их фрагментов, находящихся в крови пациента или других биологических жидкостях:

• мокрота;
• легочные и бронхиальные смывы;
• моча.

Обратите внимание. Высокая результативность данной методики основана на принципе работы фермента полимеразы (основная функция сборка нуклеиновых молекул). Она может узнавать даже самые мелкие фрагменты генного материала возбудителя. Поэтому результат будет положительный или отрицательный.

Преимущества анализа ПЦР на микобактерии туберкулеза:

• выявление специфических последовательностей ДНК микобактерий;
• точность – 98%;
• чувствительность анализа не менее 100 ДНК-копий в 5 мкл пробе, прошедшей особую обработку;
• срочный анализ дает возможность получить результат в течение 4 ч., после забора крови.

Использование полимеразной цепной реакции существенно облегчило определение многих заболеваний (не только туберкулеза). Причем метод позволяет регистрировать наличие патогена на самых начальных стадиях патогенеза, когда нет еще никаких признаков. Гарантированность результата обеспечивается благодаря тому, что полимераза среди тысяч клеток может находить по определенному маркеру комплементарные (подходящие) только ей последовательности бактериальных генов или даже их фрагменты.

Помимо этого, ПЦР при туберкулезе помогает выяснить уровень резистентности к назначенной терапии и скорректировать лечение, что в разы повышает его эффективность. Длительность такого анализа три, максимум четыре дня, но при этом врач получает данные, существенно меняющие качество противотуберкулезной терапии. Более подробно обо всех нюансах полимеразной цепной реакции изложено на видео в этой статье.

Методика выполнения

Инструкция проведения анализа на данный момент не представляет особой сложности: сначала проводится отбор исследуемого материала, после чего выделяется ДНК и проводится его классификация по типу патогенной бактерии. Основные моменты указаны в таблице.

Таблица. Как проводится анализ ПЦР на туберкулез:

Для получения достоверного результата, дающего максимальную точность, понадобится проведение около 25–30 циклов, что даст возможность получить необходимое количество копий бактериальных ДНК. При этом они подлежат классификации. Это требует наличия специально оборудованной лаборатории, поэтому не во всех регионах есть возможность проведения ПЦР. Соответственно и цена исследования не является низкой.

В особых случаях данный метод является единственно возможным или крайне необходимым, например:

• при наличии противопоказаний к другим диагностикам;
• в спорных ситуациях;
• при рецидиве туберкулеза;
• определение стадийности патогенеза.

Заметка. Если анализ ПЦР проводится для человека после противотуберкулезной терапии, то результат может быть ложноположительным. Это связано с наличием в крови очень малого количества мертвых бактерий или они еще находятся на стадии лизиса (клеточной смерти).

ПЦР анализ мочи на туберкулез

Суть метода та же, что и при исследовании крови. Однако в данном случае требуется определенный алгоритм сдачи и подготовки. ПЦР мочи поможет выявить микобактерии при наличии очагов в органах выделительной системы и подобрать соответствующую терапию.

Перед забором урины важно хорошо вымыть гениталии. Утреннюю мочу (среднюю порцию) собирают в контейнер и отправляют в лабораторию. Других подготовительных мер не требуется, питание накануне анализа остается без изменений.