- Специальность ВАК РФ 16.00.03
- Количество страниц 284
Оглавление диссертации доктор ветеринарных наук Боганец, Нина Сергеевна
ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ.
1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.
1.1.Возбудитель туберкулеза и его основные свойства.
1.2. Методы диагностики туберкулеза животных.
1.3. Бактериологическая диагностика туберкулеза.
1.3.1. Бактериоскопический метод.
1.3.2. Культивирование микобактерий на питательных средах.
1.3.2.1. Консервирование, хранение и предварительная обработка биологического материала.
1.3.2.2. Питательные среды и их совершенствование.
1.3.3. Биологическая проба на лабораторных животных.
2. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ.
2.1. Материал и методы исследований.
2.1.1. Место и сроки выполнения работы.
2.1.2.Соответствие работы тематическим планам НИР.
2.1.3. Гносеология работы.
2.1.4. Сельскохозяйственные и лабораторные животные.
2.1.5. Культуры микобактерий.
2.1.6. Диагностические препараты.
2.1.7. Экспериментально-производственные хозяйства.
2.1.8. Мясоперерабатывающие предприятия.
2.1.9. Основные лабораторные приборы и оборудование.
2.1.10. Питательные среды.
2.1.11. Объемы диагностических исследований.
2.1.12. Первичная документация.
2.1.13. Методы и методики исследований.
2.1.14. Экономическая эффективность научных разработок.
2.1.15. Математическая обработка экспериментальных данных.
3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ.
3.1. Уровень бактериологической диагностики -туберкулеза животных в РФ.
3.2. Вндовон спектр микобактерий, изолированных от крупного рогатого скота и из внешней среды в регионе Сибири.
3.2.1. Частота изоляции и видовой состав микобактерий.
3.2.2. Коллекция музейных эпизоотических штаммов микобактерий
3.2.3. Характеристика культуры М. bovis, шт. 14 (ВНИИБТЖ). ‘
3.3. Усовершенствование культурального метода бактериологического исследования.
3.3.1. Влияние методов консервирования биологического материала на высеваемость микобактерий.
3.3.2. Сравнительная оценка методов предварительной обработки биологического материала.
3.3.3. Эффективность различных видов пробок при хранении культур микобактерий.
3.3.4. Влияние различных концентраций серной кислоты на высеваемость микобактерий из биологического материала.
3.3.5. Информативность плотных питательных сред при культивировании разных видов микобактерий.
3.3.6. Информативность плотных питательных сред с использованиехМ химических и биологических добавок.
3.3.7. Совершенствование технологии приготовления плотных питательных сред.
3.4. Усовершенствование биологического метода диагностики туберкулеза.
3.4.1. Чувствительность белых мышей к М. bovis.
3.4.2. Эффективность интратестикулярного заражения морских свинок
3.4.3. Ускоренная постановка биологической пробы на морских свинках в диагностике туберкулеза животных на основе феномена Коха
3.4.3.1. Теоретическое обоснование.
3.4.3.2. Летальная доза туберкулина для здоровых морских свинок.
3.4.3.3. Летальная доза туберкулина для морских свинок, зараженных М. bovis.
3.4.3.4. Оптимальный срок введения туберкулина, вызывающий гибель зараженных М. bovis морских свинок.
3.4.3.5. Летальность морских свинок после введения туберкулина в зависимости от дозы заражения культурой М. bovis.
3.4.4. Методика ускоренной постановки биологической пробы на туберкулез.
3.4.5. Комиссионное производственное испытание метода ускоренной постановки биологической пробы на туберкулез.
3.4.6. Экономическая эффективность метода ускоренной постановки биологической пробы на туберкулез.
4. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ ИССЛЕДОВАНИЙ.
6. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ.
Одной из ведущих, наиболее сложных и экономически значимых проблем в инфекционной патологии животных является туберкулез. В начале XXI века эпизоотическая обстановка в России, несмотря на тенденцию улучшения в целом, остается напряженной. Экономический ущерб от туберкулеза крупного рогатого скота за последние 45 лет в РФ превысил 85 млрд. рублей. При этом экономика животноводства потеряла около 6 млн. голов крупного рогатого скота, 15,3 млн. тонн молока, 1,6 млн. тонн мяса и 3,5 млн. голов приплода (Ю.И. Смолянинов, 2004).
Решающая роль в системе противоэпизоотических мероприятий при туберкулезе животных принадлежит диагностике. Арсенал средств и методов диагностики туберкулеза достаточно богат и разнообразен, разработка и совершенствование которых продолжается со времен открытия возбудителя. Однако основными методами первичной диагностики туберкулеза, результаты которой предопределяют окончательный эпизоотический статус хозяйства, являются патологоанатомический и бактериологический.
Несмотря на успехи, достигнутые наукой и практикой в вопросах бактериологической диагностики, на современном этапе в связи с установленным фактом эволюционной изменчивости возбудителя, широким и зачастую бесконтрольным применением лекарственных средств и биопрепаратов, экологическим техногенным прессом, а также коренными преобразованиями ведения животноводства в стране в значительной мере снизились эффективность и информативность бактериологического исследования при туберкулезе животных.
В связи с этим ревизионная оценка, разработка и усовершенствование комплекса бактериологической диагностики туберкулеза в современных условиях ведения животноводства и внедрение их в ветеринарную бактериологическую практику представляется весьма актуальным.
Цель и задачи исследований. Целью исследований явилось усовершенствование методов бактериологической диагностики туберкулеза животных в системе противоэпизоотических мероприятий.
Задачи исследований: провести анализ уровня бактериологической диагностики туберкулеза животных в Российской Федерации; изучить видовой спектр, структуру и основные свойства микобактерий, персистирующих в организме крупного рогатого скота и среде его обитания в регионе Сибири; изучить культурально-морфологические, биохимические и патогенные свойства культуры М. bovis, шт. 14 (ВНИИБТЖ); дать оценку методов консервирования, хранения и предварительной обработки биологического материала; дать сравнительную характеристику и повысить информативность плотных питательных сред с использованием химических, биологических добавок и усовершенствовать технологию их приготовления; изучить возможность использования в качестве биологических моделей при туберкулезе белых мышей; отработать регламент использования ППД туберкулина для млекопитающих при воспроизведении анафилактического шока у зараженных культурой М. bovis морских свинок (феномен Коха);
— разработать метод ускоренной постановки биологической пробы на морских свинках в диагностике туберкулеза животных, определить экономическую эффективность метода.
Научная иовизна и теоретическая значимость. Впервые представлен ретроспективный анализ результатов бактериологической диагностики туберкулеза животных в РФ за 2001-2005 гг. Изучена частота изоляции и спектр патогенных и атипичных микобактерий, персистирующих в организме крупного рогатого скота и среде его обитания на территории Сибири. Изолирован эпизоотический патогенный для лабораторных животных и крупного рогатого скота высоковирулентный штамм возбудителя туберкулеза бычьего вида (шт. 14, ВНИ-ИБТЖ), стабильно сохраняющий свои свойства. Изучены его культурально-морфологические, биохимические и биологические свойства.
Получены новые данные по комплексу бактериологического исследования при туберкулезе — хранения и предварительной обработки биоматериала, повышения эффективности и информативности, культурального и биологического методов исследований.
В качестве биологической модели при экспериментальном туберкулезе предложены белые мыши линий BALB/C, C57BL/6 и аутбредные.
Дано теоретическое обоснование и, на основе феномена Коха впервые разработан способ диагностики туберкулеза животных путем воспроизведения анафилактического туберкулинового шока (Изобретение, патент № 2265403). Отработан регламент использования ППД туберкулина для млекопитающих при воспроизведении анафилактического шока — летальные дозы для здоровых и зараженных М. bovis, сроки введения аллергена и гибели лабораторных животных в зависимости от заражающей дозы. Изучена эффективность предлагаемого ускоренного метода постановки биопробы на морских свинках в диагностике туберкулеза животных.
Результаты исследований вносят существенный теоретический вклад в решение проблемы диагностики туберкулеза и могут быть использованы при совершенствовании системы противотуберкулезных мероприятий.
Практическая значимость и внедрение результатов исследований.
Основные положения диссертации, выводы и практические предложения доложены, обсуждены на межлабораторном заседании ВНИИБТЖ и рекомендованы к защите (Протокол от 20.12.2005 г.).
Основные положения, выносимые на защиту.
1. Видовой состав и свойства микобактерий, персистирующих в организме крупного рогатого скота и среде его обитания на территории Сибири.
2. Культурально-морфологические, биохимические, патогенные и вирулентные свойства культуры М. bovis, шт. 14 (ВНИИБТЖ).
3. Усовершенствованный комплекс бактериологических исследований при туберкулезе животных.
4. Метод ускоренной постановки биологической пробы на морских свинках в диагностике туберкулеза животных и его эффективность.
Публикация результатов исследований.
Объем и структура диссертации.
Диссертация изложена на 26f4 страницах компьютерного текста и состоит из введения, обзора литературы, собственных исследований, выводов, практических предложений, списка литературы и приложений. Работа иллюстрирована 65 таблицами и 16 рисунками. Список литературы включает 724 источника, в том числе 166 иностранных авторов.