Гамма-интерфероновый тест на туберкулез

Дата обновления: 2017-12-28

Наряду с такими методами диагностики туберкулеза, как реакция Манту и диаскинтест, существует и относительно новый для России метод, позволяющий в условиях лаборатории подтвердить или опровергнуть этот диагноз. Это квантифероновый тест на туберкулез. В нашей стране на сегодняшний день тест не приобрел широкую популярность даже несмотря на положительные отзывы фтизиатров, а в странах ЕС и США этот способ диагностики довольно распространен.

Суть метода

Основное отличие квантиферонового теста от других методов диагностики туберкулеза заключается в том, что в организм человека при этом анализе не нужно вводить туберкулин: исследования проводятся in vitro, то есть, в пробирке. А это, в свою очередь, исключает возможное развитие аллергических реакций и других негативных последствий, присущих кожным тестам, а также исключает какие-либо противопоказания к проведению исследования.

Кроме того, точность диагностики инфицирования возбудителями туберкулеза с помощью квантиферонового теста в разы превышает аналогичный показатель прежних методов. Ведь, как известно, реакция Манту зачастую дает ложноположительный результат, равно как и отрицательный результат проведенной пробы нельзя однозначно расценивать как отсутствие микобактерий (возбудителей туберкулеза) в организме.

Суть метода заключается в изучении реакции иммунных клеток организма, полученных из венозной крови, на M.tuberculosis complex. Инфекция определяется при выделении гамма-интерферона — основного белка, который стимулирует иммунный ответ организма при столкновении с микобактериями туберкулеза. Выявление этого белка позволяет достоверно диагностировать наличие возбудителя туберкулеза — палочки Коха — в организме.

Но положительный тест может свидетельствовать о двух состояниях организма:

1. Инфицирование микобактериями, латентная стадия (то есть, организм встретился с возбудителями туберкулеза, но заражения туберкулезом не произошло, какие-либо симптомы развития болезни отсутствуют).
2. Наличие в организме микобактерий, активное развитие туберкулеза.

То есть, проведение этого анализа целесообразно лишь для выявления возбудителей туберкулеза в организме. Но он не дает ответа, развивается ли заболевание или приняло латентную форму, также тест покажет положительный результат, когда болезнь успешно пролечена, ведь инфицирование организма остается на всю жизнь.

Показания к назначению анализа

Квантифероновый тест (или по-другому интерфероновый тест на туберкулез) основывается на той же ответной реакции клеток организма, отвечающих за иммунитет, что и диаскинтест.

Но есть существенные отличия:

Указанные антигены отсутствуют в составе вакцины БЦЖ, поэтому при таком анализе, в отличие от реакции Манту, у вакцинированных БЦЖ детей не проявится ложноположительная реакция.

Следует учитывать, что наиболее оправдано назначение квантиферонового теста детскому населению, ведь практически каждый взрослый человек в России оказывается инфицирован палочкой Коха (при этом не заражен туберкулезом), а тест рассчитан именно на выявление возбудителя болезни в организме, а не на диагностику самого заболевания.

Показатели чувствительности и специфичности

Любые методы диагностики принято оценивать по двум критериям:

1. Чувствительность. Этот показатель характеризует метод диагностирования по количеству возможных ложноотрицательных результатов и рассчитывается отдельно для разных категорий пациентов, а затем выводится усредненный процент. Метод считается тем более чувствительным, чем выше этот процент. То есть, при 100-процентной чувствительности ложноотрицательный результат невозможен.
2. Специфичность также измеряется в процентах и указывает, какова вероятность ложноположительной реакции. 100-процентная специфичность указывает на то, что ошибочная положительная реакция исключена.

Исходя из вышеперечисленных параметров, можно сравнить точность наиболее популярных тестов для диагностики туберкулеза:

• чувствительность: квантиферонового теста — 84%, диаскинтеста — 85%, реакции Манту — 100%;
• специфичность: квантиферонового теста — 99%, диаскинтеста — 99%, реакции Манту — 75%.

Таким образом реакция Манту никогда не даст ложноотрицательный результат при проведении диагностики, а диаскинтест и квантифероновый тест, напротив, практически не имеют ложноположительной реакции.

Как проводят анализ

Для проведения лабораторного анализа пациенту необходимо сдать кровь из вены. Количество крови, необходимое для анализа, и для взрослых, и для детей одинаково — 1 мл.

Для правильного проведения теста нужно соблюдать несколько условий:

• забор крови проводят в утренние часы;
• перед сдачей крови пациенту нельзя принимать пищу и жидкость менее, чем за 8 часов до процедуры.

Для начала в лаборатории определяют общий уровень иммунитета пациента методом иммуноферментного анализа (ИФА).

Далее из крови выделяют плазму, которую разделяют на три пробирки разного цвета:

1. Antigen (красного цвета) — в нее помещают антигены, которые в случае активной реакции (то есть, в случае инфицирования) вызывают рост иммунных клеток.
2. Nil- пробирка (серого цвета) В этой пробирке отсутствует ДНК возбудителя туберкулеза и присутствует гепарин. Биоматериал в этой пробирке используют для определения общего уровня иммунной системы человека. Если гамма-интерферон не выделяется, результат оценивается как норма. Эта пробирка является контрольно-отрицательной.
3. Mitogen — фиолетовая пробирка — содержит митоген — вещество, стимулирующее деление Т-клеток. Нормой считается выделение гамма-интерферона. Такая пробирка считается контрольно-положительной.

Плюсы и минусы метода

К явным преимуществам квантиферонового теста перед другими методами диагностики относятся:

• высокий процент специфичности теста, то есть, вероятность ложноположительного результата сведена к 1%;
• точность оценки результатов, так как исследование проводится в условиях лаборатории, что исключает погрешность, присущую оценке кожных проб;
• отсутствие противопоказаний и побочных эффектов;
• скорость получения результатов (в отличие от квантиферонового теста, результаты диаскинтеста можно оценивать спустя двое суток, а реакции Манту — трое суток).

Однако, несмотря на все преимущества квантиферонового теста, существуют у него и недостатки:

• показатель чувствительности теста оценивается как средний, в результате возрастает вероятность получения ложноотрицательной реакции;
• не во всех населенных пунктах проведение этого анализа доступно;
• стоимость проведения квантиферонового теста довольно высока (нижняя граница цены анализа — от 1600 рублей), в то время как проба Манту делается пациентам бесплатно.

На данный момент этот анализ является относительно новым видом исследования. Для его проведения необходимо специальное оборудование, а также высокий уровень квалификации специалистов, проводящих анализ.

Вероятно, с течением времени тест станет более доступен, и список его недостатков сократится.

Как оценивают результат

В результате теста возможны три вида реакции: отрицательная, положительная и сомнительная.

Стоит помнить и о вероятности ложноотрицательного результата теста. Вероятность такой реакции выше у детей младше пяти лет и у лиц с иммунодефицитом.

Где можно провести анализ

Квантифероновый тест в России проводят в государственных научно-исследовательских институтах и некоторых частных медицинских лабораториях.

Указанный тест проводят в Центральном НИИ туберкулеза РАМН и в НИИ фтизиопульмонологии при МГМУ имени И.М. Сеченова.

Однако здесь проводят только сам тест по предоставленному биоматериалу. Это значит, что кровь нужно будет сдавать в другом месте и доставить ее в лабораторию в течение двух часов после забора. В зимнее время нужно учитывать, что замораживание крови для квантиферонового теста недопустимо.

Кроме указанных НИИ, анализ крови на туберкулез проводится в ряде известных диагностических лабораторий, имеющих широкую сеть по всей стране, но тут есть свои особенности.

Поэтому если возникла необходимость проведения именно квантиферонового теста, рекомендуется обратиться в доступные территориально организации, занимающиеся лабораторными исследованиями. Возможно, на момент обращения лаборатория сможет обеспечить проведение этой процедуры.

Туберкулез – опасное инфекционное заболевание, способное длительно протекать бессимптомно. Для выявления инфицирования туберкулезными микобактериями проводят тест на туберкулез.

Туберкулиновые пробы

Заражение выявляют с помощью введения под кожу препарата с названием Туберкулин, который впервые был получен в 1890 г. Робертом Кохом из культуры возбудителей туберкулеза.

В состав Туберкулина входят низкомолекулярные белки, нуклеиновые кислоты, липиды, полисахариды, получившиеся при разрушении микобактерий.

Препарат не содержит живых бактерий и не может вызвать заражения.

Диагностические туберкулиновые пробы проводят всем, кроме новорожденных, перед введением вакцины БЦЖ. При положительном результате прививку БЦЖ не делают из-за риска осложнений.

Первоначально Туберкулин вводили подкожно под лопатку. Для получения результата должно было пройти 48-72 часа. В месте укола за это время появлялась папула, а у пациента повышалась температура, ухудшалось самочувствие.

Если организм бурно реагировал на подкожную пробу, то предполагалось, что человек заражен палочкой Коха (микобактериями). При отсутствии реакции человек считался здоровым.

В 1907 г. врачом К. Пирке был предложен скарификационный метод. Для его проведения использовалась вытяжка из сухого очищенного туберкулина.

При проведении исследования:

• кожу предплечья обрабатывают карболовой кислотой;
• наносят царапину глубиной 5 мм;
• капают раствор туберкулина.

Оценка теста проводится через 2-3 суток. Положительный результат пробы у детей до 3 лет означает активную стадию болезни. После 3 лет положительная накожная проба указывает на первичное заражение микобактерией.

Усовершенствовал пробу Пирке в 1908 г. доктор Ш. Манту. Пробу Манту ставят на предплечье, Туберкулин вводят внутрь кожи, что позволило исключить возможность воспаления накожной царапины.

В месте введения развивается воспаление, появляется покраснение участка кожи.

По величине папулы делают вывод о состоянии противотуберкулезного иммунитета.

Для детей, которые проходили вакцинацию БЦЖ меньше года назад, нормальным считается положительный результат пробы Манту.

Тесты на основе белков туберкулезных бактерий

Стратегия ВОЗ по туберкулезу направлена на снижение смертности от него к 2035 г. на 95%. Условием снижения смертности является ранняя диагностика инфицирования. С этой целью созданы новые точные методы определения присутствия туберкулезных микобактерий в организме человека.

Созданы способы выявления инфекции с помощью Диаскинтеста, Квантиферона, Тубинферона.

Эти методы позволяют выявить белки CFP-10, ESAT-6, которые синтезируются только опасными для человека M. Tuberculosis.

Диаскинтест и Тубинферон вводятся внутрь кожи. Для проведения квантиферонового теста берут кровь пациента и проводят исследование в пробирке.

Квантифероновый метод и Диаскинтест отличаются более высокой чувствительностью к микобактериям, чем туберкулиновые пробы при тестировании детей и взрослых, вакцинированных БЦЖ.

Туберкулез — не приговор! Наша постоянная читательница порекомендовала действенный метод! Новое открытие! Ученые выявили лучшее средство, которое моментально избавит вас от туберкулеза. 5 лет исследований. Самостоятельное лечение в домашних условиях! Тщательно ознакомившись с ним, мы решили предложить его и вашему вниманию. Читать далее >>

При отсутствии вакцинации БЦЖ более точным оказывается туберкулиновая проба Манту.

Прогноз болезни улучшается при диагностике на стадии ранних симптомов болезни с помощью экспресс-тестов на туберкулез. В аптеке можно приобрести ИммуноХром-анти-МТ-Экспресс и, следуя инструкции, выполнить его в домашних условиях самостоятельно.

При сомнительной реакции пройдите его повторно, а если получен положительный результат, нужно пройти обследование в противотуберкулезном диспансере.

Точным способом выявления туберкулеза является Диаскинтест. При проведении пробы вместо туберкулина внутрикожно вводят смесь из белков CFP-10, ESAT-6.

Исследование назначают для уточнения результатов пробы Манту. Результаты проверяют через 3 суток.

Положительный результат указывает на стадию первых признаков заражения или активной фазы болезни. Диаскинтест редко дает ошибочные результаты, так как отличается высокой специфичностью к M. tuberculosis.

Тубинфероновый метод разработан в России. Под кожу вводится смесь очищенного туберкулина и белков CFP-10, ESAT-6. С помощью тубинферонового теста можно выявить заражение туберкулезом.

Тубинферон чувствительнее, чем другие методы при выявлении скрытой туберкулезной инфекции, что важно для улучшения прогноза заболевания.

Чем раньше будет начато лечение такими сильными антибиотиками, как Рифампицин, Диоксидин, Изониазид, тем выше вероятность полного выздоровления.

Проводится квантифероновый тест на туберкулез вне организма и позволяет обнаружить заболевание, протекающее в скрытой и активной форме. Главное его преимущество – незначительный риск ложноположительных результатов и отсутствие их у людей, вакцинированных БЦЖ.

Для исследования необходима цельная кровь, в которой есть T-лимфоциты. Если пациент был инфицирован туберкулезом, то T-лимфоциты при встрече с белками микобактерии начинают активно выделять гамма-интерферон. По количеству выделенного гамма-интерферона определяют тяжесть инфекции.

Чтобы провести гамма-интерфероновый тест на туберкулез:

• берут кровь из вены;
• добавляют образцы в 3 пробирки с белками CFP-10, ESAT-6;
• ожидают реакцию T-лимфоцитов;
• определяют количество синтезированного гамма-интерферона в пробирке.

С использованием квантиферонового теста диагностика туберкулеза достигает точности 99,1%. А проведение исследования вне организма исключает риск побочных эффектов и аллергической реакции.

Выбирая, какой способ диагностики надежнее, нельзя забывать о доступности метода по цене:

1. Пробу Манту можно сделать за 400-700 руб.
2. Цена Квантиферона составляет 1900-3500 руб.
3. Экспресс-тест на туберкулез ИммуноХром-анти-МТ-Экспресс стоит 400 руб.

К положительным сторонам Квантиферона относится отсутствие противопоказаний, высокая специфичность и отсутствие зависимости от календаря детских прививок.

Метод можно использовать для проверки на туберкулез у детей, которым противопоказано проведение туберкулиновой пробы.

Вне организма можно проводить диагностику туберкулезного инфицирования Хайн-тестом. Этот метод выявляет ДНК микобактерии в мокроте. Недостаток исследования в отсутствии различий между живыми и погибшими палочками Коха, что не позволяет использовать Хайн-тест для контроля лечения.

Для определения активной формы заболевания используются иммунохроматографический экспресс-тест SD BIOLINE для выявления белка MPT64, который вырабатывается микобактериями. Иммунологический способ диагностики позволяет идентифицировать микобактерии туберкулеза с точностью 98,5-100%.

Несмотря на высокую специфичность тестов, основанных на выявлении белков микобактерий, окончательный диагноз ставит фтизиатр, основываясь на результатах нескольких видов лабораторных исследований крови, мочи и мокроты.

Тест для диагностики латентной туберкулезной инфекции и активного туберкулеза, основанный на измерении интерферона-гамма, вырабатываемого сенсибилизированными Т-лимфоцитами в ответ на специфические антигены M . tuberculosis .

Интерфероновый тест на туберкулез, ИФН-гамма тест на туберкулезную инфекцию.

QuantiFERON, Interferon-gamma assay, IGRA, T-cel lassay, Interferon-γ release essay, Cytokine detection assay.

Какой биоматериал можно использовать для исследования?

Общая информация об исследовании

Для диагностики латентной туберкулезной инфекции (ЛТБИ) в большинстве стран, в том числе и в России, используется туберкулиновая проба (проба Манту). До недавнего времени она являлась единственным методом диагностики ЛТБИ. Хотя этот метод широко распространен, он не лишен недостатков. Так как очищенный туберкулин (ППД), используемый в реакции Манту, представляет собой смесь более 200 антигенов M. tuberculosis, большая часть из которых идентична антигенам, входящим в состав вакцины БЦЖ и других видов микобактерий (нетуберкулезные микобактерии), на результат пробы Манту может влиять вакцинация БЦЖ в прошлом и/или наличие нетуберкулезной микобактериальной инфекции. Кроме того, для проведения пробы Манту необходимо как минимум два обращения к врачу (постановка пробы и измерение ширины папулы через 48-72 часа), что на практике не всегда выполнимо. Для того чтобы улучшить и упростить диагностику ЛТБИ, был разработан новый метод, основанный на измерении иммунного ответа сенсибилизированных к M. tuberculosis Т-лимфоцитов. Он получил название квантифероновый тест.

При наличии ЛТБИ или активного туберкулеза в крови присутствуют сенсибилизированные к этому микроорганизму Т-лимфоциты, способные при взаимодействии с антигенами M. tuberculosis вырабатывать интерферон-гамма. Квантифероновый тест основан на выявлении и количественном измерении вырабатываемого интерферона-гамма при добавлении венозной крови в пробирку, содержащую специфические антигены M. tuberculosis, в том числе ESAT-6 и CFP-10. Так как в исследовании используется смесь антигенов, специфических для туберкулезной палочки, квантифероновый тест более специфичен, чем проба Манту. Он не дает ложноположительных реакций при вакцинации БЦЖ в анамнезе или при наличии нетуберкулезной микобактериальной инфекции.

Специфичность квантиферонового теста в отношении инфицирования M. tuberculosis выше, чем специфичность пробы Манту (98-100 % против 55-95 %). Предсказательное значение положительного результата квантиферонового теста в отношении прогрессии ЛТБИ в активный туберкулез выше, чем положительного результата пробы Манту (2,8-14,3 % против 2,3-3,3 %). Преимуществом квантиферонового теста также является и то, что для его осуществления достаточно одного обращения к врачу. Результат теста, как правило, готов через 48 часов.

Благодаря высокой информативности и легкости выполнения, квантифероновый тест находит все более широкое применение в клинической практике. Он рекомендован для диагностики как ЛТБИ, так и активного туберкулеза. Чаще его используют вместо пробы Манту, однако в некоторых случаях оба теста используются одновременно.

Использование квантиферонового теста вместо пробы Манту

Квантифероновый тест может быть использован вместо пробы Манту во всех клинических ситуациях, когда показано проведение пробы Манту в качестве теста для диагностики инфекции M. tuberculosis.

1. Использование квантиферонового теста предпочтительнее (хотя проба Манту также может применяться) в следующих случаях:

• в группах пациентов, которые по опыт, не всегда возвращаются к врачу на второй прием для оценки результата пробы Манту (например, лица с наркотической зависимостью);
• у пациентов, получивших вакцину БЦЖ в прошлом (для вакцинации или лечения рака).

2. Использование пробы Манту предпочтительнее (хотя квантифероновый тест также может применяться):

3. Ситуации, в которых может быть использован или квантифероновый тест, или проба Манту, без предпочтения:

• при обследовании лиц, находившихся в контакте с пациентами с активным туберкулезом или подозрением на активный туберкулез («контактных» лиц); в случае если квантифероновый тест был проведен менее чем через 8 недель после прекращения контакта, его рекомендуется повторить через 8-10 недель после прекращения контакта — эта рекомендация заимствована из алгоритма действий при постановке реакции Манту, так как данных о сероконверсии при использовании квантиферонового теста нет; при повторном тестировании рекомендуется использовать один и тот же тест;
• при периодическом обследовании лиц, имеющих риск заражения туберкулезом по роду деятельности (например, врачей).

Использование квантиферонового теста совместно с пробой Манту

В целом совместное использование квантиферонового теста и пробы Манту не рекомендуется. Однако оно может потребоваться при получении отрицательного результата первоначального теста (квантиферонового или пробы Манту) в следующих ситуациях:

• высокий риск инфицирования M. tuberculosis, развития активного туберкулеза и его осложнений (пациенты с ВИЧ, дети младше 5 лет);
• присутствуют клинические симптомы, указывающие на активный туберкулез — в таком случае положительный результат повторного теста подтверждает инфекцию, а отрицательный результат первоначального теста следует считать ложноотрицательным; следует отметить, что даже многократные повторные отрицательные результаты квантиферонового теста или его комбинации с пробой Манту не позволяют полностью исключить инфекцию M. tuberculosis у таких пациентов.

Совместное использование квантиферонового теста и пробы Манту может потребоваться при получении положительного результата первоначального теста (квантиферонового или пробы Манту) в следующих ситуациях:

• когда для подтверждения инфекции требуются дополнительные данные, например при положительном результате пробы Манту у вакцинированного БЦЖ пациента — в этом случае положительный результат подтверждающего (квантиферонового) теста позволяет не только выявить ЛТБИ, но и улучшить приверженность пациента проводимому лечению;
• в группе здоровых пациентов, имеющих низкий риск инфицирования M. tuberculosis, — как и в случае с пробой Манту, квантифероновый тест не рекомендован в группах пациентов с низким риском инфицирования M. tuberculosis; в случае если распространенность туберкулеза менее 1 %, даже если специфичность теста приближается к 99 %, большинство положительных результатов будут ложноположительными; в таком случае отрицательный результат повторного теста исключает инфекцию, а положительный результат первоначального теста следует считать ложноположительным.

Совместное использование квантиферонового теста и пробы Манту может потребоваться, если результат первоначального теста неопределенный, пограничный или неинформативный.

При интерпретации результата квантиферонового теста следует учитывать следующее:

• тест не позволяет различить ЛТБИ и активный туберкулез;
• у пациентов с клиническими признаками активного туберкулеза положительный результат теста позволяет подтвердить инфекцию, отрицательный же результат теста у таких пациентов исключить туберкулез не позволяет;
• у пациентов из группы низкого риска инфицирования M. tuberculosis однократный положительный результат квантиферонового теста не является доказательством инфекции; ввиду малой вероятности инфицирования в этой группе пациентов положительный результат, вероятнее всего, является ложноположительным, может быть рекомендовано повторное исследование;
• квантифероновый тест – это непрямой метод диагностики, основанный на выявлении и измерении степени иммунного ответа пациента на M. tuberculosis; в отличие, например, от бактериологического метода (посева), квантифероновый тест не определяет сам микроорганизм, его результат в значительной степени зависит от состояния иммунной системы пациента;
• квантифероновый тест не может быть использован в качестве основного метода диагностики ЛТБИ или активного туберкулеза. Это дополнительный тест, используемый в сочетании с анамнестическими, клиническими, другими лабораторными и инструментальными данными.

Важно отметить, что диагностическое значение квантиферонового теста до сих пор не было должным способом оценено у детей, ВИЧ-инфицированных пациентов, а также при наличии внелегочного туберкулеза. Четких рекомендаций по интерпретации результата квантиферонового теста у таких пациентов нет. Также не в полной мере исследованы феномен реверсии квантиферонового теста и его интерпретация.

Для чего используется исследование?

• Диагностика латентной туберкулезной инфекции и активного туберкулеза.

Когда назначается исследование?

• В качестве основного теста при профилактическом осмотре лиц, находящихся в группе риска инфицирования M. tuberculosis (медицинские работники, «контактные лица», пациенты с иммуносупрессиией – ВИЧ-инфекция, применение кортикостероидов, сахарный диабет, алкоголизм).
• В качестве подтверждающего теста после проведения пробы Манту.
• При наличии признаков активного туберкулеза: кашля, кровохарканья, потери веса, ночных профузных потов, стойкого субфебрилитета, рентгенологических признаков туберкулеза.

Что означают результаты?

Референсные значения: отрицательно.

• латентная туберкулезная инфекция (ЛТБИ);
• активный туберкулез.

Что может влиять на результат?

• Время с момента заражения M. tuberculosis. Феномен сероконверсии/реверсии квантиферонового теста изучен недостаточно.
• Состояние иммунной системы.



• Диагностическое значение квантиферонового теста до сих пор не было должным способом оценено у детей, ВИЧ-инфицированных пациентов, а также при наличии внелегочного туберкулеза.
• Интерпретацию результата следует проводить с учетом анамнестических, клинических, других лабораторных и инструментальных данных.

63 Определение неоптерина в сыворотке крови (диагностика туберкулеза и вирусных инфекций)